电泳图谱分析,镰刀型细胞贫血症电泳图谱分析

1.每个标本都应该是自己的内参，而不是同一个内参！2.每个标本在实际做之前都要感受到最佳循环数，包括内参，但是内参的循环数不一定和目标基因的循环数相同，要选择上升期的中间数作为最佳循环数，否则进入平台期就无法比较了！所以内部参考应该有自己的最优周期数！3.电泳扫描后计算灰度值，先与同一标本的内参和目的进行比较，再用这个相对值与你要比较的其他平行组进行比较，一般每组4个以上的样品。

将扩增产物和标记点在胶上，运行电泳，然后扫胶，与标记比较，看扩增产物的条带大小是否与预测大小相同，也看是否只有一条条带跑出一个孔，看是否有杂质。通过凝胶成像系统拍照，注意调整对比度。如果你在写报告，你可以标记每一个标记带的分子量和亮度。详情见说明书。那么说明扩增的片段和目的片段大小一样，都是xx；如果图像中有条带，请检查一下分析，如引物二聚体，以便下次实验时适当调整退火温度或各组分的用量。

DNA提取成功与否，不是通过PCR扩增后电泳的结果来判断，而是在DNA提取后立即用电泳来检测23kb处是否有不带拖尾的亮带。要检测16SrRNA是否扩增成功，你要将PCR产物电泳凝胶化，看是否在1.6kb处有条带，提取细菌DNA后，在电泳80V下20min，在点样孔附着处有一条尖锐的条带，不分散。基本上可以认为DNA提取比较好。

质粒与分析无关。你的质粒看起来有三条带，正常闭环(超螺旋)，开环和线性。虽然大小相同，但状态不同，这三种形态的分离率电泳不同，分离速度也不同，分为三个区。闭环(超螺旋)、开环和线性的螺旋率依次降低。第三次pcr扩增大小在750bp左右，下面模糊的应该是引物二聚体。

这取决于你运行的是什么DNA样本。如果质粒的三条带正常，最快的是超螺旋，慢的是开环，最慢的是线性，都是质粒提取过程中产生的。如果用试剂盒提取质量好的质粒，只有一条超螺旋带。以你给的信息，只能证明以下两点:1。你的样本含有DNA.2 .最快的DNA含量最大。如果要分析，需要提供更多信息。

楼上两位很擅长分析，但我想补充一下Lucia对质粒三带的解释。现在对三个带的解释如下:最快的一个是超螺旋，质粒是超螺旋，当你电泳，最亮是正常的；中间是开环质粒(因为质粒在提取过程中被物理和机械力打断)；最后是质粒的复制中间体(即两个复制不完全的质粒连接在一起)，可想而知，后两者很少，所以电泳 band不亮。